Quais são as chaves para bons dados QPCR?

Algumas diretrizes gerais para obter bons dados qPCR:

1. RNA de alta qualidade: É essencial usar RNA de alta qualidade com alta pureza e integridade para reações qPCR, pois a qualidade do RNA pode afetar a precisão e reprodutibilidade dos resultados.

2. Curvas de calibração: É importante incluir curvas padrão para cada ensaio de qPCR para garantir a quantificação precisa do gene alvo.

3. Controlos adequados: em conjunto com as amostras desconhecidas, devem ser incluídos controlos positivos e negativos adequados, tais como os controlos não-modelo, para detectar qualquer contaminação ou amplificação de produtos não específicos.

4. otimização das condições de reação: As condições para a execução de um ensaio de qPCR devem ser otimizadas, incluindo temperatura de recozimento, concentração de primer e volume de reação.

5. Normalização de dados: A normalização dos dados é essencial para levar em conta as diferenças entre as amostras e minimizar a variabilidade.

6. Replicates: A execução de réplicas para cada amostra ajuda a reduzir a variabilidade e aumentar a confiança nos resultados.

7. Análise estatística: Uma análise estatística adequada deve ser realizada para determinar a significância dos resultados e comparar entre grupos.

PREV: Como escolher os tubos de centrífuga certos?

PRÓXIMO: Fatores que afetam a precisão do pipetor