Processos padrão para reação de PCR

O processo de PCR padrão é dividido em três etapas:

Desnaturação de DNA: (90 °-96 ° C): O modelo de DNA de fita dupla sofre clivagem de ligação de hidrogênio sob ação térmica, formando DNA de fita simples

Recozimento: (60 °C-65 °C): À medida que a temperatura do sistema diminui, o primer se liga ao molde de DNA, formando uma fita dupla local.

Extensão: (70 °C-75 °C): Sob a ação da enzima Taq (em torno de 72 °C, com a melhor atividade), o dNTP é usado como material de partida, estendendo-se da extremidade 3 'do primer na direção da extremidade 5 '→ 3', para sintetizar fitas de DNA complementares ao molde.

Após cada ciclo de desnaturação, recozimento e extensão, o conteúdo de DNA dobra. Hoje em dia, alguma PCR pode se replicar em pouco tempo, mesmo que a atividade da enzima Taq não seja ótima devido à curta região de amplificação. Portanto, um método de duas etapas pode ser usado, que envolve o recozimento e alongamento simultaneamente entre 60 e 65 °C, para reduzir um aumento de temperatura e diminuir o processo e melhorar a velocidade de reação.

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